酵母雙雜交文庫構建技術(shù)服務(wù)

酵母雙雜交文庫構建技術(shù)服務(wù)介紹
酵母雙雜交技術(shù)產(chǎn)生以來(lái)，主要應用在以下幾個(gè)方向：
1、檢驗一對功能已知蛋白間的相互作用。
2、 研究一對蛋白間發(fā)生相互作用所必需的結構域。
3、 用已知功能的蛋白基因篩選雙雜交cDNA文庫，以研究蛋白質(zhì)之間相互作用的傳遞途徑。
4、分析新基因的生物學(xué)功能，即以功能未知的新基因去篩選文庫。通常依靠報告基因的轉錄激活來(lái)鑒定蛋白相互作用。將一個(gè)基因克隆到"誘餌"載體，并和GAL4蛋白的DNA結合域(DBD)表達為融合蛋白。將第二個(gè)基因或者編碼可能的相互作用子蛋白的cDNA文庫克隆到"獵物"載體，同GAL4的轉錄激活域(AD)表達為融合蛋白。當兩個(gè)蛋白相互作用時(shí)，AD和DBD間距離被拉近，從而激活報告基因的表達。
本服務(wù)項目使用infusion重組系統進(jìn)行重組，使用zhuan利的cDNA合成方法進(jìn)行cDNA的合成。
實(shí)驗步驟
1.1.RNA提取
1.2.mRNA分離
1.3.cDNA合成（使用酶促法直接合成，不經(jīng)過(guò)PCR擴增過(guò)程，比SMART方法質(zhì)量大大提高）
1.4.cDNA長(cháng)度分級
1.5.分級后的cDNA與酵母雙雜載體(pGADT7、pGADT7-REc2、pDEST22、pB42AD、pPR3N等載體，或者客戶(hù)載體)進(jìn)行infusion重組。
1.6.重組后產(chǎn)物電轉化感受態(tài)細胞
1.7.文庫鋪板檢測與菌液保存
1.8.文庫質(zhì)粒提取
產(chǎn)品內容
我們提供構建好的酵母文庫的甘油菌液（含20%甘油的LB培養基），文庫甘油菌，隨機克隆子的PCR鑒定圖譜，文庫構建報告，酵母雙雜交篩選相關(guān)細胞和質(zhì)粒。
質(zhì)量標準
3.1文庫庫容量：大于1*10^7CFU。
3.2平均插入片段：大于1.2Kbp。
3.3陽(yáng)性率：大于95%。
服務(wù)時(shí)間
20個(gè)工作日內
備注1：該酵母文庫可以選擇增加均一化處理步驟，我們使用DSN法均一化方法，可以構建出高質(zhì)量的均一化酵母雜交文庫，可以大大減少后續酵母篩選的工作量和篩選效率等。
提供的產(chǎn)品
詳細的實(shí)驗報告
酵母雙雜交（酵母單雜交）文庫質(zhì)粒、菌液
備注2：如果客戶(hù)需要轉化酵母，我們可提供100管酵母甘油菌工作液及母液（同clontech）。
服務(wù)周期
獲得合格的總RNA后25工作日，如需轉化酵母延長(cháng)15個(gè)工作日。
材料要求
客戶(hù)構建的酵母雙雜交cDNA文庫，由客戶(hù)提供組織、細胞或總RNA給我們即可：細胞樣本：細胞數量大于1*10^7
動(dòng)物樣本：大于1g
物樣本：大于2g
總RNA：大于200u
服務(wù)流程 
1、提交項目課題相關(guān)需求和資料。 
2、與我們的專(zhuān)業(yè)技術(shù)團隊討論項目細節。 
3、根據討論后的意見(jiàn)對實(shí)驗方案進(jìn)行修改。 
4、雙方均滿(mǎn)意并達成一致，簽訂技術(shù)服務(wù)合同。 
5、開(kāi)展實(shí)驗，按期完成合同規定的內容。 
6、結題，提供實(shí)驗原始結果和分析結果、實(shí)驗流程、實(shí)驗條件等等。 
咨詢(xún)與訂購 
感謝您選擇我們的服務(wù)，如果您有任何問(wèn)題，請聯(lián)系我們，我們將竭誠為您解答和服務(wù)。