多種多樣的類(lèi)器官

類(lèi)器官是在體外培養的來(lái)源于干細胞的具有自組織特性的一種三維細胞結構，是一種簡(jiǎn)單的、微觀(guān)的器官模型。

一、類(lèi)器官的分類(lèi)

表1 類(lèi)器官根據其來(lái)源的分類(lèi)

1.多能干細胞來(lái)源的類(lèi)器官

        多能干細胞具有無(wú)限自我更新并分化為幾乎所有器官特異性的細胞類(lèi)型。ESCs來(lái)源于囊胚期內細胞團的全能干細胞，但因其應用涉及到倫理問(wèn)題導致其使用受限。iPSCs類(lèi)器官的形成過(guò)程：

這些類(lèi)器官培養基北京百奧創(chuàng )新科技有限公司可以提供，產(chǎn)品如下：

2.成體干細胞來(lái)源的類(lèi)器官

        成體組織干細胞ASCs通常來(lái)源于患者的活檢組織，但其分化能力有限，而且ASCs類(lèi)器官一般僅含有器官的上皮部分，缺乏基質(zhì)、神經(jīng)和血管系統，培養體系相對比較簡(jiǎn)單，比如小腸類(lèi)器官的培養：

3.腫瘤類(lèi)器官        

       腫瘤類(lèi)器官可保留腫瘤組織的生物學(xué)特征和異質(zhì)性，具有多次傳代后基因組保持穩定、培養周期短等優(yōu)勢，可作為腫瘤研究的理想模型。

二、類(lèi)器官的構建與培養

1.不同來(lái)源類(lèi)器官的構建
                                                     
2.以腸癌類(lèi)器官為例的類(lèi)器官培養步驟：

實(shí)驗前準備

（1）15 mL無(wú)菌離心管、1.5 mL離心管、24孔細胞培養板、移液器、移液管、無(wú)菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺中紫外照射30 min。

（2）提前30 min從4℃冰箱取出腸癌類(lèi)器官培養基（北京百奧創(chuàng )新科技有限公司提供）平衡至室溫，提前1 h從-20℃冰箱取出所需體積的基質(zhì)膠冰上融化。

腸癌類(lèi)器官培養

（1）將獲取的腸癌原代細胞懸液計數，根據計算好的體積吸取細胞懸液加入預冷的1.5 mL離心管中，補齊預冷的腸癌類(lèi)器官培養基至所需體積。
（2）將預冷后的細胞懸液加入等體積的基質(zhì)膠中輕輕混勻（全程冰上操作），避免氣泡，使腸癌原代細胞終濃度為5×10⁵個(gè)細胞/毫升。然后將細胞與基質(zhì)膠的混合液按照50 μL/孔呈半球形點(diǎn)膠于24孔板。
（3）將培養板放入5%CO₂、37℃培養箱終至少30 min，待基質(zhì)膠*凝固。沿孔壁每孔緩慢加入500 μL預先恢復至室溫的類(lèi)器官培養基，放置5%CO₂、37℃培養箱培養。
（4）3天后鏡下觀(guān)察類(lèi)器官形成情況，粒徑大于30~50 μm即認為類(lèi)器官已經(jīng)形成。

（2）將預冷后的細胞懸液加入等體積的基質(zhì)膠中輕輕混勻（全程冰上操作），避免氣泡，使腸癌原代細胞終濃度為5×10⁵個(gè)細胞/毫升。然后將細胞與基質(zhì)膠的混合液按照50 μL/孔呈半球形點(diǎn)膠于24孔板。
（3）將培養板放入5%CO₂、37℃培養箱終至少30 min，待基質(zhì)膠*凝固。沿孔壁每孔緩慢加入500 μL預先恢復至室溫的類(lèi)器官培養基，放置5%CO₂、37℃培養箱培養。
（4）3天后鏡下觀(guān)察類(lèi)器官形成情況，粒徑大于30~50 μm即認為類(lèi)器官已經(jīng)形成。

（5）每5天更換一次培養基進(jìn)行培養，持續觀(guān)察類(lèi)器官大小，鏡下觀(guān)察大部分類(lèi)器官大小均大于30~50 μm且大小不再增大即可收集類(lèi)器官進(jìn)行后續實(shí)驗。

腸癌類(lèi)器官收集

（1）棄培養基，每孔加入200 μL基質(zhì)膠解離試劑，室溫放置1 min，輕輕吹打混勻，收集至15 mL離心管中。

（2）50 rpm恒溫震蕩解離10-20 min，解離之后1500 rpm離心3 min，輕吸去上清，待用。

腸癌類(lèi)器官傳代

（1）收集的類(lèi)器官，加入適量的消化酶，37℃，200 rpm消化（具體時(shí)間根據類(lèi)器官大小和數量決定，以肉眼可見(jiàn)顆粒明顯減小一半為準，可中間取消化的類(lèi)器官顯微鏡觀(guān)察，類(lèi)器官消化至3~10個(gè)細胞集合體理想）。

（2）消化*后1500 rpm離心3 min，棄上清，使用清洗液重懸后1500 rpm離心3 min；加入預冷的腸癌類(lèi)器官培養基進(jìn)行重懸，計數，按照培養步驟操作繼續培養。

三、不同種類(lèi)類(lèi)器官形貌圖

(a)小腸類(lèi)器官.(b)結腸類(lèi)器官.(c)食管類(lèi)器官.(d)胃類(lèi)器官.(e)肝臟類(lèi)器官.

(f)胰腺類(lèi)器官.(g)肺類(lèi)器官.(h)乳腺類(lèi)器官.(i)腎類(lèi)器官.(j)腦類(lèi)器官.