預活化層析填料介紹

色譜填料又稱(chēng)層析介質(zhì)，指填充在色譜柱中具有納米孔道結構的微球材料，粒徑一般在微米尺度，納米孔道的孔徑大小在5-200 nm范圍內。色譜填料的形貌、結構、粒徑大小和分布、孔徑大小和分布、基質(zhì)及表面功能基團等都影響著(zhù)色譜填料的性能，其中基質(zhì)影響著(zhù)色譜填料的各種物理性能，比如機械強度、載量等，表面功能基團則影響著(zhù)分離模式和分離選擇性，即色譜填料的使用方向。色譜填料根據分離模式可分為預活化層析填料、凝膠過(guò)濾層析填料、疏水層析填料、離子交換層析填料、親和層析填料和多模式層析填料等。

預活化層析填料可以偶聯(lián)一個(gè)特定的配基，制備成一個(gè)可以純化一種或者幾種目標分子的親和填料。例如，可以使用抗體、抗原、酶、受體、小的核酸或者多肽作為配基，純化能與它們結合的相應的配體。

BioToolomics開(kāi)發(fā)了多種預活化層析填料，可以高效、快速、簡(jiǎn)便、安全地偶聯(lián)各種功能配體。預活化填料的基質(zhì)是由瓊脂糖制成的，具有親水性強、非特異性吸附低的特點(diǎn)，并且基質(zhì)已被高度交聯(lián)，具有很高的機械強度。

制備預活化親和層析柱的注意要點(diǎn)：

（一）配基的選擇

通常情況下，當配基分子量＜5 KDa時(shí)，需要間隔臂；對于大分子配基，間隔臂不是必須的選擇條件。例如，NHS活化瓊脂糖層析填料有一個(gè)長(cháng)間隔臂（11個(gè)原子），特別有助于固定結構受限的配體。而CNBr則沒(méi)有間隔臂，對于小分子配基（＜5KDa），當配基和樣品結合的時(shí)候，由于CNBr沒(méi)有間隔臂，可能會(huì )由于空間位阻而影響結合。因此當配基分子量＜5 KDa時(shí)，建議使用NHS活化配基填料。對于大于5KDa的配基，二者差異不大。

（二）偶聯(lián)方法的選擇

配基是通過(guò)其功能基團的反應偶聯(lián)到基質(zhì)上，所以偶聯(lián)方法的選擇取決于配基的特性。NHS、羧基、CNBr、醛基活化瓊脂糖填料通過(guò)配基的伯胺基團進(jìn)行偶聯(lián)，這幾種最主要的區別是NHS和羧基含有間隔臂，而CNBr和醛基沒(méi)有間隔臂，此外，NHS和羧基能耐受較高的pH值。環(huán)氧活化瓊脂糖填料可通過(guò)與羥基形成的穩定醚鍵固定糖和其他碳水化合物，它們也可用于偶聯(lián)含伯胺或含硫醇的分子。肼活化瓊脂糖層析填料通過(guò)形成穩定的腙鍵偶聯(lián)含醛或酮的配體。

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