NEB T4 DNA連接酶使用說(shuō)明書(shū)

NEB T4 DNA連接酶protocol:

1、在微型離心管(冰上)中設置以下反應：

（T4 DNA連接酶應最后添加。注意：表中顯示了使用1mol:3mol插入zhi定DNA大小的載體的連接。）

**注意：T4 DNA連接酶緩沖液應在室溫下解凍并重懸。

2、通過(guò)吸管上下輕輕混合反應物，并短暫地進(jìn)行微量離心。

3、對于粘性（粘性）末端，在16°C下孵育過(guò)夜或室溫下孵育10分鐘。

4、對于鈍端或單堿基懸突，在16°C下孵育過(guò)夜或室溫下孵育2小時(shí)（或者，高濃度T4 DNA連接酶可用于10分鐘的連接）。

5、在65°C下加熱滅活10分鐘。

6、在冰上冷卻，將1-5μl的反應轉化為50μl的感受態(tài)細胞。

NEB T4 DNA連接酶使用時(shí)的注意事項：

1、ATP 是反應中必不ke少的輔因子。這與需要 NAD 作為輔因子的 E. coli DNA 連接酶不同。

2、若需稀釋 T4 DNA 連接酶，推薦使用含 50% 甘油的貯存緩沖液（稀釋緩沖液 A，NEB #B8001S）稀釋?zhuān)缓笥?-20℃ 貯存。如稀釋后立即使用，也可以使用 1X T4 DNA 連接酶反應緩沖液稀釋。

3、連接反應可以在添加 1 mM ATP 的四種限制性?xún)惹忻妇彌_液的任何一種或在 T4 多聚核苷酸激酶（T4 PNK）緩沖液中進(jìn)行。

4、室溫連接。

有關(guān)更多NEB T4 DNA連接酶的介紹，請聯(lián)系百奧創(chuàng )新客服！

NEB T4 DNA連接酶代理——北京百奧創(chuàng )新科技有限公司，成立于2017年，由經(jīng)驗豐富的技術(shù)團隊、商業(yè)團隊及管理團隊組建而成，專(zhuān)注于免疫學(xué)、細胞生物學(xué)、分子生物學(xué)等領(lǐng)域核心試劑產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)與銷(xiāo)售基于“客戶(hù)第一"的核心理念，百奧創(chuàng )新在產(chǎn)品自主研發(fā)的同時(shí)，也與全球多家生命科學(xué)試劑供應商建立良好的合作關(guān)系，向全球10，000+客戶(hù)提供200，000+優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。百奧創(chuàng )新將以品質(zhì)樹(shù)立品牌，以服務(wù)贏(yíng)得口碑，致力于成長(cháng)為重要的生物化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)與成果轉化的kai tuo zhe，并成為行業(yè)ling xian的優(yōu)質(zhì)品供應商。