天根全血dna提取試劑盒說(shuō)明書(shū)

天根全血dna提取試劑盒簡(jiǎn)介：

本試劑盒采用可以特異性結合DNA的離心吸附柱和dute的緩沖液系統，提取血液中的基因組DNA。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司新型材料，高效、專(zhuān)一吸附DNA,可有效去除雜質(zhì)蛋白及細胞中其他有機化合物。提取的基因組DNA片段大，純度高，質(zhì)量穩定可靠。

使用本試劑盒純化的DNA適用于酶切、PCR、文庫構建、Southern雜交等各種常規實(shí)驗，和芯片雜交、高通量測序等高質(zhì)量DNA需求的實(shí)驗。

天根全血dna提取試劑盒特點(diǎn)：

1.樣本適用廣泛：可從抗凝血(EDTA,肝素等)、白膜層和血凝塊等樣品中直接提取基因組DNA。

2.高質(zhì)量：dute的裂解緩沖體系，純化的DNA具有高濃度，高純度，完整性好等特點(diǎn)，滿(mǎn)足芯片雜交，高通量測序等實(shí)驗需求。

3.快速低毒：采用硅膠膜吸附原理，無(wú)需酚氯仿，1h內即可完成實(shí)驗。

天根全血dna提取試劑盒操作步驟：

1.處理血液樣品(本產(chǎn)品適用于處理100μl-1ml血液樣品):

a.提取200μl血液樣品時(shí)，可直接進(jìn)行下一步實(shí)驗。

b.提取小于200μl血液樣品時(shí)，可加緩沖液GS補足體積至200μl,再進(jìn)行下一步實(shí)驗。注意：步驟a和b適用于大多數100-200μl血液樣品的提取，但有些血液樣品由于蛋白，糖類(lèi)，脂類(lèi)含量較多或樣本儲存條件不佳會(huì )導致OD260/0D230比值偏低，如需提高OD260/0D230比值可在樣品中加入1-2.5倍血液樣品體積的細胞裂解液CL進(jìn)行處理，具體步驟同c。

c.提取大于200μ血液樣品時(shí)，需細胞裂解液CL處理，具體步驟如下：在樣品中加入

1-2.5倍血液樣品體積的細胞裂解液CL,顛倒混勻，10,000 rpm(~11,500×g )離心1

min,吸去上清，留下細胞核沉淀(如果裂解不chedi，可加入1-2.5倍血液樣品體積的細胞裂解液CL重復裂解一次),向細胞核沉淀中加200μl緩沖液GS,振蕩至chedi混勻，再進(jìn)行下一步實(shí)驗。

d.當處理血樣為禽類(lèi)、鳥(niǎo)類(lèi)、兩棲類(lèi)或更低級生物的抗凝血液，紅細胞有核細胞，因此處理量為5-20μl,加緩沖液GS補足200μl,再進(jìn)行下一步實(shí)驗。

e.當處理血樣為血凝塊，可選擇液化柱CX1(TIANGEN,RK165)(需自備)對血凝塊進(jìn)行液化處理，具體步驟如下：

e1.取血凝塊至液化柱CX1中，12,000 rpm(~11,500×g)離心1 min,收集濾液(若血凝塊量大可分批多次過(guò)柱離心，收集濾液)。

e2.取100μl-1 ml濾液加入1-2.5倍血液樣品體積的細胞裂解液CL,顛倒混勻，10,000rpm(~11,500×g)離心1min,吸去上清，留下細胞核沉淀(如果裂解不chedi，可加入1-2.5倍血液樣品體積的細胞裂解液CL重復裂解一次),向收集到的細胞核沉淀中加200μl緩沖液GS,振蕩至chedi混勻，再進(jìn)行下一步實(shí)驗。

注意：如果需要去除RNA,可加入4 μl RNase A(100 mg/ml)溶液(TIANGEN,RT405-12)(需自備)至上述處理獲得的200μl樣品中，振蕩15 sec,室溫放置5min。

2.加入200μl緩沖液GB和20μl Proteinase K的預混溶液至上述處理獲得的200μl樣品中，充分顛倒混勻，56℃放置10 min,其間顛倒混勻數次，溶液應變清亮(如溶液未chedi變清亮，請延長(cháng)裂解時(shí)間至溶液清亮為止)。

注意：加入緩沖液GB時(shí)可能會(huì )產(chǎn)生白色沉淀，一般37℃放置時(shí)會(huì )消失，不會(huì )影響后續實(shí)驗。如溶液未變清亮，說(shuō)明細胞裂解不chedi，可能導致提取DNA量少和提取出的DNA不純。當血液體積≥200μl且沒(méi)有采用紅細胞裂解處理，或是樣本儲存條件不佳，水浴后顏色可能為深褐色，注意溶液中沒(méi)有團塊等沉淀。

注意：如果血液樣品經(jīng)過(guò)細胞裂解液CL處理，大多數情況下加入緩沖液GB充分顛倒混勻后，室溫放置5 min(其間顛倒混勻1-2次)即可得到高質(zhì)量基因組DNA。

3.室溫放置2-5 min后加入350μl緩沖液BD,充分顛倒混勻，此時(shí)可能會(huì )出現絮狀沉淀。

4.將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個(gè)吸附柱CG2中(吸附柱CG2放入收集管中),12,000 rpm(~13,400×g)離心30 sec,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CG2放入收集管中。

5.向吸附柱CG2中加入500μl緩沖液GDB,12,000 rpm(~13,400×g )離心30 sec,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CG2放入收集管中。

6.向吸附柱CG2中加入600 μl漂洗液PWB(使用前請先檢查是否已加入無(wú)水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g)離心30 sec,倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CG2放入收集管中。

7.重復操作步驟6。

注意：如果血樣經(jīng)過(guò)細胞裂解液CL處理，可省略步驟7。

8. 12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min,倒掉廢液。將吸附柱CG2置于室溫放置2 min,以chedi晾干吸附材料中殘余的漂洗液。

注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會(huì )影響后續的酶反應(酶切、PCR等)實(shí)驗。

注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會(huì )影響后續的酶反應(酶切、PCR等)實(shí)驗。

9.將吸附柱CG2轉入1.5 ml離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加50-200 μl洗脫緩沖液TB,室溫放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g)離心2min,將溶液收集到離心管中。注意：洗脫緩沖液體積不應少于50l,體積過(guò)小影響回收效率。為增加基因組DNA的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱CG2中，室溫放置2 min,12,000 rpm (~13,400×g)離心2 min。洗脫液的pH對于洗脫效率有很大影響。若用ddH?O做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5范圍內，pH值低于7.0會(huì )降低洗脫效率；且DNA產(chǎn)物應保存在-20℃,以防DNA降解。

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