【轉染小課堂】帶你了解轉染的奧妙和神奇！

轉染(Transfection):是真核細胞主動(dòng)或被動(dòng)導入外源DNA片段而獲得新的表型的過(guò)程。

原理：將DNA導入細胞使得它可利用細胞自身的細胞機制表達和合成蛋白質(zhì)，將RNA導入細胞則是用來(lái)通過(guò)終止翻譯來(lái)降低某特定蛋白的合成。

轉染的RNA在細胞質(zhì)中發(fā)揮作用，DNA則需被轉運到細胞核中從而達到有效的轉染。在核內，DNA會(huì )被短暫表達或整合到基因組DNA而將該遺傳改變傳代到下一代細胞。

轉染類(lèi)型：

瞬時(shí)轉染：外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此，一個(gè)宿主細胞中可存在多個(gè)拷貝數，產(chǎn)生高水平表達，但通常只持續幾天，多用于啟動(dòng)子和其他調控元件的分析，在轉染后24-96h內分析結果。一般來(lái)說(shuō)，超螺旋質(zhì)粒DNA轉染效率較高，在轉染后24-72小時(shí)內（依賴(lài)于各種不同的構建）分析結果，常常用到一些報告系統如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來(lái)幫助檢測。

穩定轉染：外源DNA既可以整合到宿主染色體中，也可以作為一種游離體整合到宿主細胞中。外源DNA整合到染色體中概率很小，大約1/104轉染細胞能整合，通常需要通過(guò)一些選擇性標記，如來(lái)氨丙基轉移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素B磷酸轉移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反復篩選，得到穩定轉染的同源細胞系。

轉染方式：

正向轉染：細胞培養板中先加入細胞然后再加入轉染復合物的方法。例如：DEAE-葡聚糖法、磷酸鈣法、脂質(zhì)體介導法、非脂質(zhì)體的脂質(zhì)活化的樹(shù)枝狀分子介導法、病毒介導法等。

反向轉染：核酸和轉染試劑復合物先加入到孔板中，然后再向小孔中加入細胞。例如：顯微注射、電穿孔、基因槍等。

化學(xué)方法:使用載體分子中和或使帶負電荷的核酸帶正電荷，包括DEAE-葡聚糖法、磷酸鈣法、非脂質(zhì)體脂質(zhì)分子介導法、陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉染、通過(guò)其他陽(yáng)離子聚合物(如聚乙烯，PEI，活化的樹(shù)枝狀分子介導法)。

生物方法:依靠病毒包裝將非病毒基因轉移到細胞中的方法(也稱(chēng)為轉導)，包括病毒介導法。

物理方法:將核酸直接遞送到細胞質(zhì)或細胞核中，包括顯微注射、電穿孔、基因槍。

轉染影響因素：

核酸類(lèi)型：質(zhì)粒DNA，mRNA，siRNA，miRNA的mimic和inhibitors...

細胞密度：一般來(lái)說(shuō)，當細胞密度達到60%~80%時(shí)進(jìn)行轉染可以取得較高的轉染效率，過(guò)低或過(guò)高都會(huì )影響轉染效果。

細胞類(lèi)型：如原代細胞、貼壁細胞、懸浮細胞、神經(jīng)細胞、腫瘤細胞、昆蟲(chóng)細胞等。

細胞系的健康程度和存活力

轉染試劑類(lèi)型:脂質(zhì)體、非脂質(zhì)體的脂質(zhì)和活化的樹(shù)枝狀分子。

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