Serochem PEI轉染試劑在CHO懸浮細胞上的轉染步驟

Serochem PEI轉染試劑在CHO懸浮細胞上的轉染步驟如下：

一、轉染前

傳代和擴增細胞以獲得具有大于95%的活力和介于（1.5至2.0）x 10⁶之間的活細胞密度的培養物.

二、轉染

1.在轉染前，確保生存能力大于95%，活細胞密度為（1.5至2.0）x 10 6細胞/mL。

2.將活細胞密度稀釋至1.05 x 10 6每毫升細胞數。

3.轉化pDNA和PEI引物™ 1 mg/mL試劑容器多次以充分混合。

4.將每mL培養物轉移1μg pDNA至一個(gè)干凈的小瓶中轉染。用新鮮培養基（5%最終培養體積）稀釋至20μg/mL。

5.將5μL PEI Prime轉移到一個(gè)干凈的小瓶中™ 每毫升1毫克/毫待轉染的培養物。使用培養基稀釋至75μg/mL（5%最終培養物

體積）。

6.將稀釋的pDNA和PEI Prime™混合在一起. 反轉幾次，然后允許在室溫下加蓋休息10分鐘。輕輕翻轉，使用前立即關(guān)閉容器

一次。

7.使用10mL pDNA/PEI混合物用于每90mL待培養的培養物轉染。一邊攪拌一邊逐漸將混合物加入培養基中。

8.按照典型條件培養細胞。

三、轉染后

如果使用飼料、加強劑、補充劑或增強劑，在轉染后6小時(shí)可以添加。

根據細胞培養基的不同，可能需要添加鈉丁酸鹽添加到培養基中以獲得CHO懸浮液中的基因表達。如有必要，確定，制備5個(gè)

轉染后的亞培養物，并添加丁酸鈉至0、2.5、5、7.5或10mM的最終濃度基于最終產(chǎn)率的適當濃度。如果使用GFP對照，轉染效率應超過(guò)70%。48小時(shí)后觀(guān)察。對于優(yōu)化的程序，超過(guò)80%的效率是合理的。監測表達水平并在觀(guān)

察到穩定滴度后收獲。對于典型的過(guò)程，在轉染后5至7天分泌的蛋白質(zhì)將最高。其他工藝，如使用低溫和/或使用批進(jìn)料以獲得

最大產(chǎn)量，將改變峰值收獲窗口。

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