蛋白質(zhì)純化都有哪些方法？

蛋白純化是指通過(guò)基因工程技術(shù)將編碼蛋白的核酸序列導入到宿主細胞，使其大量表達，再使用適當的純化方法將其在體外純化出來(lái)，從而獲得高純度、活性和產(chǎn)量的蛋白質(zhì)。那么蛋白質(zhì)純化方法都有什么呢？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、凝膠過(guò)濾層析：

根據分子大小從混合物中分離蛋白質(zhì)，不同蛋白的形狀及分子大小存在差異，在混合物通過(guò)含有填充顆粒的凝膠過(guò)濾層析柱時(shí)，由于各種蛋白的分子大小不同，擴散進(jìn)入特定大小孔徑顆粒內的能力也各異，大的蛋白分子會(huì )被先洗脫出來(lái)，分子越小越晚洗脫。

二、離子交換層析：

依據蛋白表面所帶電荷量不同進(jìn)行蛋白分離純化，蛋白表面通常會(huì )均勻帶有一定的電荷，在一定條件下可以與陽(yáng)/陰離子交換柱結合。在改變pH或者用逐漸增加離子強度的緩沖液洗脫時(shí)，結合的物質(zhì)可與洗脫液中的離子發(fā)生交換而被洗脫到溶液中。由于不同物質(zhì)的電荷不同，與離子交換柱的結合能力也不同，所以被洗脫到溶液中的順序也不同。

三、疏水作用層析：

利用蛋白質(zhì)的疏水性，蛋白經(jīng)變性處理或處于高鹽環(huán)境下疏水殘基會(huì )暴露于蛋白表面，不同蛋白疏水殘基與固定相的疏水性配體之間的作用強弱不同，依次用從高至低離子強度洗脫液可將疏水用作由弱至強的組分分離。

四、親和層析：

把待純化的某一蛋白質(zhì)（或在蛋白質(zhì)上加上標簽）的特異配體通過(guò)適當的化學(xué)方法共價(jià)連接到載體分子上，當蛋白質(zhì)混合物加到填有親和介質(zhì)的層析柱時(shí)，待純化的蛋白質(zhì)與配體特異性結合，而其他蛋白質(zhì)則不被結合，通過(guò)洗滌除去，被特異結合的蛋白質(zhì)可以用含游離的相應配體溶液洗脫下來(lái)。

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