Elabscience Annexin V-FITC / PI細胞凋亡檢測試劑盒的檢測原理與注意事項

Elabscience Annexin V-FITC / PI細胞凋亡檢測試劑盒是用于檢測懸浮細胞和貼壁細胞的凋亡試劑盒。那么你知道Annexin V-FITC / PI細胞凋亡檢測試劑盒的檢測原理與注意事項嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、檢測原理

    Annexin V 是一種鈣離子依賴(lài)性磷脂結合蛋白，與磷脂酰絲氨酸 (PS) 有高度親和力。當細胞發(fā)生 凋亡時(shí)，膜內側的磷脂酰絲氨酸 (PS) 外翻到膜表面，而被熒光染料 FITC 標記的 Annexin V 結合，可 通過(guò)流式細胞儀或熒光顯微鏡進(jìn)行檢測。

    由于凋亡晚期或壞死細胞膜喪失完整性，而碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）可與雙鏈 DNA 特異 性結合并產(chǎn)生強烈的熒光，與 Annexin V 搭配使用，可區分處于不同凋亡時(shí)期的細胞。 本試劑盒檢測喜樹(shù)堿誘導的 Jurkat 細胞凋亡效果如下圖所示：

Jurkat細胞用5 μM 喜樹(shù)堿（Camptothecin）(左) 或未加藥 (右) 處理 4 h，本試劑盒染色后流式檢測。Annexin V-FITC單陽(yáng)細胞為早期凋亡細胞，Annexin V-FITC和PI雙陽(yáng)細胞為壞死或 晚期凋亡細胞，PI 單陽(yáng)細胞為裸核細胞。

二、注意事項

1. 檢測貼壁細胞時(shí)，需收集誘導凋亡后產(chǎn)生的懸浮細胞，并與后續收集的貼壁細胞一起檢測。

2. 應盡量避免消化貼壁細胞帶來(lái)的機械損傷。同時(shí)，胰酶的消化液中應盡量不含EDTA，因為EDTA會(huì )影響Annexin V與磷脂酰絲氨酸的結合。

3. 如果使用含EDTA 的胰酶，收集細胞后應充分清洗，確保 EDTA 被去除干凈。

4. 染色后宜盡快檢測，時(shí)間過(guò)長(cháng)可能會(huì )導致凋亡或壞死細胞的數量增加。

5. 熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀(guān)察時(shí)，盡量縮短觀(guān)察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存。

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