Elabscience Caspase 2活性檢測試劑盒的檢測原理與注意事項

Elabscience Caspase 2活性檢測試劑盒采用分光光度法，可用于檢測細胞、組織裂解液或其它樣本的 caspase 2 活性。那么你知道Elabscience Caspase 2活性檢測試劑盒的檢測原理與注意事項是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

Caspase 2 也稱(chēng) Ich-1 (ICE and CED-3 homolog 1)或 Nedd-2，在細胞凋亡的信號轉導過(guò)程中可以被激活。Caspase 2 mRNA可以被剪切成兩種不同長(cháng)短的形式。Caspase 2 全長(cháng)的 mRNA產(chǎn)物可以促進(jìn)凋亡，而短的 mRNA 的蛋白產(chǎn)物則可以抑制細胞凋亡。在體外，Caspase 2 可以被 caspase 1、caspase 3 和granzyme B 激活。

一、檢測原理

本caspase2活性檢測試劑盒是基于caspase2可以催化底物Ac-VDQQD-pNA 產(chǎn)生黃色的 pNA(p-nitroaniline)，pNA在405nm附近有強吸收，從而可以通過(guò)測定吸光度來(lái)檢測caspase 2 的活性。

二、注意事項

1. 所有待檢樣本都需檢測蛋白濃度，由于樣本裂解液中含有還原劑，不適合使用 BCA 法進(jìn)行蛋白濃度測定，推薦使用考馬斯亮藍法（Bradford 法）。

2. 建議在正式實(shí)驗前，選擇2~3個(gè)預期差異大的樣本進(jìn)行預實(shí)驗，若樣本吸光值超過(guò)標準曲線(xiàn)的測量范圍，則需稀釋樣本或者調整上樣量再進(jìn)行測定。

3. 進(jìn)行caspase 2活性測定的樣本，其蛋白濃度應在1~4 mg/mL，否則會(huì )影響實(shí)驗結果的準確性。

4. 一次實(shí)驗的細胞數目建議不低于1×10⁶個(gè)，組織樣本不低于50mg，以便達到1~4 mg/mL的蛋白濃度。否則會(huì )影響實(shí)驗的精準度，導致蛋白濃度過(guò)低，反應體系內活性caspase 2過(guò)少而OD值偏低。

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