細胞培養中的消化傳代操作是指將細胞從當前的培養瓶、皿中分離出來(lái)，經(jīng)過(guò)消化處理后，分散到新的培養瓶、皿中進(jìn)行繼續培養。那么你知道細胞消化的注意事項有什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！
一、胰蛋白酶的選擇
EDTA是一種螯合劑，可以與金屬離子結合。含有EDTA的胰蛋白酶除了具有胰蛋白酶的消化作用外，還具有螯合金屬離子的作用。在細胞培養中，含有EDTA的胰蛋白酶，通過(guò)螯合細胞表面的鈣離子，破壞細胞與細胞之間的黏附作用，從而使細胞分離出來(lái)。
因此，如果需要進(jìn)行細胞解離和分離操作，可以選擇含有EDTA的胰蛋白酶；如果只需要進(jìn)行消化傳代操作，可以選擇不含EDTA的胰蛋白酶。
二、消化時(shí)間的掌握
消化時(shí)間的長(cháng)短會(huì )影響細胞的生長(cháng)和狀態(tài)。如果消化時(shí)間過(guò)長(cháng)，可能會(huì )導致細胞死亡或者受損；如果消化時(shí)間過(guò)短，則可能會(huì )導致細胞未能完q分散，影響細胞的生長(cháng)和分化。但細胞多長(cháng)時(shí)間能被消化下來(lái)，并不完q取決于胰蛋白酶，還和消化的溫度、細胞的密度、以及消化環(huán)境有關(guān)。
通常，37°C下進(jìn)行消化可以縮短消化時(shí)間。我們的胰蛋白酶平時(shí)一般放在冰箱內，在消化操作之前，可以提前拿出。加入胰蛋白酶后，可以把培養瓶放入培養箱內進(jìn)行消化，這樣可以有效縮短消化時(shí)間。另外，不應該在細胞密度太高時(shí)才想起來(lái)進(jìn)行消化傳代。當密度太高時(shí)，細胞之間的黏連會(huì )加劇，此時(shí)同等的消化條件，會(huì )需要花費更多的時(shí)間進(jìn)行消化，進(jìn)一步提高了判斷消化進(jìn)度的難度。比較合理的傳代密度應該在70-80%之間。
三、其他注意事項
在加入胰蛋白酶之前，通常會(huì )使用pbs進(jìn)行潤洗，潤洗后，應該徹d扔棄瓶?jì)鹊膒bs后，再加入胰蛋白酶進(jìn)行消化。
加入胰蛋白酶的量應該是剛剛沒(méi)過(guò)整個(gè)培養瓶底部即可。
在消化過(guò)程中，如果發(fā)現細胞解離太快，可以把培養瓶豎起來(lái)，讓瓶壁上殘留的消化液進(jìn)行消化。
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