細胞鋪板不勻的解決方法有哪些？

細胞接種鋪板作為體外藥理實(shí)驗中最基本的技能，是實(shí)驗成敗的關(guān)鍵因素。鋪板不勻又是科研實(shí)驗中通往成功道路的一大障礙，細胞聚集導致的接觸抑制現象使實(shí)驗數據的可信度大打折扣。本片文章將會(huì )介紹細胞鋪板不勻的解決方法有哪些？一起來(lái)跟小編漲知識吧！

對于96孔板，每孔通常加入100μL細胞懸液。加樣方式為傾斜槍頭，從孔的左邊靠近底部緩慢加入（加樣過(guò)快同樣容易導致細胞聚集）。筆者建議，每加完半拉板子時(shí)，把細胞重新混勻，繼續加樣。加樣結束后，鏡下觀(guān)察如有局部不均勻現象，可以采取敲擊法，具體操作如下：將板子置于臺面上，左手持住板子的左邊，右手輕輕敲擊板子的右邊緣(5-8次)，力度太強或次數太多會(huì )反而更易導致細胞聚集。將板子順時(shí)針旋轉，依次敲擊剩余三個(gè)邊（據說(shuō)逆時(shí)針效果不好），靜置約5-10分鐘后，放入37℃培養箱。

對于6孔板、12孔板或24孔板，為防止表面張力導致的中間液面太低細胞聚集的現象。通常每孔首先滴加少量培基，輕輕晃動(dòng)浸潤整個(gè)孔底以保證板子的孔底都是濕潤的，這樣加液后細胞懸液會(huì )平鋪在整個(gè)孔底，可以避免加在中間位置和加在周邊晃勻后周邊細胞局部太多的現象，細胞分散會(huì )較均勻。注意加完細胞懸液后要放工作臺靜置一下（5-10分鐘）。鏡下觀(guān)察細胞均勻度，如不均勻可采用以下8字法、十字法及震蕩法等方法進(jìn)行細胞均勻度處理。具體操作如下：

 方法一(8字法)：這種方法也是大家最常見(jiàn)的細胞搖勻方法。橫向8字搖勻法參考下圖，搖動(dòng)次數根據鏡下觀(guān)察和個(gè)人力度具體分析（參考：保證液體不被晃動(dòng)出去，8字晃動(dòng)5次理論上就可以基本晃勻）。搖勻結束，切忌在鏡下移動(dòng)觀(guān)察視野太久，以免伴隨著(zhù)輕微的移動(dòng)，細胞又往中間聚集。

方法二(十字法): 細胞鋪完板后，在水平方向上，上下左右四個(gè)方向進(jìn)行移動(dòng)，呈十字形狀，重復5-6次。有些同學(xué)覺(jué)得十字法搖勻效果并不好，方法關(guān)鍵的是搖完后最好直接放入培養箱中，不要再做過(guò)多的移動(dòng)（也有同學(xué)建議可以在培養箱中搖勻）。另外，同樣不建議放到鏡下長(cháng)時(shí)間去觀(guān)察。

方法三(十字類(lèi)似法)：細胞鋪完板后，放在水平板面上先上下移動(dòng)，再左右移動(dòng)，每個(gè)方向5-6次。其他具體操作同十字法。

方法四(震蕩法)：細胞懸液加完后，將細胞培養板抬高，對著(zhù)燈光，從底部往上看，看細胞有沒(méi)有抱團。然后從底部敲擊，使之分散。如果實(shí)驗室有平板振蕩器的話(huà)，我建議用這個(gè)儀器稍振蕩一下，效果不錯，就是振幅小，頻率高的那種。（個(gè)人不太推薦這種方法，板子接觸振蕩器后增加了染菌的風(fēng)險，而且轉速的調節和時(shí)間的掌握比較困難）。
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