EZBioscience彩色染料法qPCR試劑盒(預混 ROX2型)(A0012-R2)產(chǎn)品介紹

EZBioscience^® 2× Color SYBR Green qPCR 預混液 （ROX2 plus） 使用經(jīng)過(guò)特殊修飾的 Taq DNA 聚合酶，該聚合酶受熱啟動(dòng)保護活化技術(shù)和優(yōu)化的qPCR緩沖液系統，以進(jìn)行基于SYBR Green I的實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）。該混合物補充了惰性紅色染料。以及 EZBioscience^® 彩色逆轉錄試劑盒含有惰性藍色染料，以避免移液錯誤。在qPCR反應中將cDNA和其他組分混合在一起，使溶液變成紫色。這在移液時(shí)提供了視覺(jué)幫助，并降低了反應設置過(guò)程中移液錯誤的風(fēng)險，尤其是在使用白色反應容器時(shí)。染料不影響qPCR反應的特異性或靈敏度。該混合物以 2× 的反應濃度制備，可直接用于高模板和低模板 qPCR，具有高靈敏度、特異性和可靠性。

常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法：

1. 陰性對照組可觀(guān)察到明顯擴增

原因：使用的試劑或水被污染、引物二聚體的外觀(guān)

解決方法：更換新試劑或水并重試。反應應在超凈臺架上進(jìn)行，以盡量減少空氣污染、在35個(gè)周期后，陰性E對照組出現擴增是正常的可以結合熔融曲線(xiàn)進(jìn)行分析

2. ct值出現太晚(大)

原因：放大效率低、模板的濃度太低、模板退化、擴增子太長(cháng)、反應中存在PCR抑制劑

解決方法：優(yōu)化反應，嘗試三步程序或重新設計引物、增加模板量，同時(shí)避免破壞擴增效果、準備新的模板，然后重試、擴增子的長(cháng)度建議在100bp~200 bp之間、添加模板時(shí)通常會(huì )引入抑制劑，增加稀釋倍數或準備新模板并重試。

3. 擴增曲線(xiàn)形狀異常

原因：擴增曲線(xiàn)粗略、曲線(xiàn)斷裂、曲線(xiàn)突然下降

解決方法：信號弱而引起的系統整流，升高模板濃度并重復反應、模板的濃度太高，基線(xiàn)的結束值大于Ct值，減少基線(xiàn)的末端(Ct值-4)，并重新分析數據、反應管中存在氣泡，當溫度升高時(shí)，氣泡破裂，從而儀器檢測到熒光值的突然降低，快速旋轉，仔細檢查反應前是否有氣泡。

產(chǎn)品選購：