免疫熒光技術(shù)是一種建立在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎之上的先進(jìn)技術(shù)。它基于抗原抗體反應的原理，首先將已知的抗原或抗體標記上熒光標簽，然后使用這些熒光標記的抗體（或抗原）作為探針，用來(lái)探查細胞或組織中的相應抗原（或抗體）。那么你知道免疫熒光實(shí)驗的常見(jiàn)問(wèn)題與注意事項嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！
一、注意事項：
為進(jìn)行免疫熒光實(shí)驗，我們需要準備細胞樣本，而這些細胞樣本有多種來(lái)源和處理方式。
一種是可以使用直接附著(zhù)在蓋玻片上的貼壁細胞。這類(lèi)細胞在培養時(shí)，只需將蓋玻片放入培養皿中，細胞便會(huì )在上面黏附并生長(cháng)。這種方法特別適用于附著(zhù)性較好的細胞類(lèi)型，因為可以減少后續漂洗步驟時(shí)細胞脫落的風(fēng)險。
另一種選擇是使用離心分離后的懸浮細胞，這些細胞需要制備成涂片。此外，還可以從體內組織中獲得細胞懸液，然后通過(guò)離心制備成涂片，這適用于特定實(shí)驗需求。
在選擇細胞準備方式時(shí)，需根據具體實(shí)驗的要求和所使用的細胞類(lèi)型來(lái)決定，以確保最終獲得可靠的免疫熒光實(shí)驗結果。
二、常見(jiàn)問(wèn)題：
1、無(wú)/弱染色烤片溫度過(guò)高，推薦56℃-60℃1-2h；一抗是否適用固定液和石蠟切片，使用濃度是否過(guò)低，孵育是否時(shí)間過(guò)短等。
2、非特異性背景染色是否滅活內源性過(guò)氧化物酶；孵育過(guò)程中干片；抗原熱修復過(guò)度。
3、染色過(guò)深一抗濃度過(guò)高；染色試濃度過(guò)高或孵育時(shí)間過(guò)長(cháng)；染色劑濃度過(guò)高或孵育時(shí)間過(guò)長(cháng)。
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