碧云天BL21 Star(DE3)超級感受態(tài)細胞(D1019S)現貨供應

產(chǎn)品名稱(chēng)：碧云天BL21 Star(DE3)超級感受態(tài)細胞(D1019S)現貨供應

產(chǎn)品貨號：D1019S

產(chǎn)品品牌：碧云天

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

碧云天BL21 Star(DE3)超級感受態(tài)細胞是一種可以用于將異源蛋白以超高水平表達的E. coli BL21 Star(DE3)即用型化學(xué)感受態(tài)細胞。使用pUC19質(zhì)粒進(jìn)行熱激活轉化，轉化效率可以高達1×108cfu/μg DNA以上。

E. coli細胞具有內源性的mRNA降解小體，其中包含由rne131基因編碼的RNase E。BL21 Star(DE3)中rne131的基因突變，導致RNase E功能缺陷，增加了目的基因的mRNA穩定性，表現為重組蛋白的超高得率。

使用說(shuō)明：

1.解凍感受態(tài)細胞。取感受態(tài)細胞放置冰浴或冰水浴中融化，通常需要5分鐘以上的時(shí)間。解凍后須盡量在10分鐘內使用，放置時(shí)間過(guò)長(cháng)會(huì )影響轉化效率。

2.DNA樣品的轉化。取一管感受態(tài)細胞，加入DNA樣品，例如質(zhì)粒、連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物等，輕輕彈擊管底約2-3次或輕輕晃動(dòng)約2-3次以混勻，立即冰浴靜置30分鐘。

注：所用DNA體積通常不宜超過(guò)感受態(tài)細胞體積的10%，混合時(shí)不得使用移液器進(jìn)行吹打。如果用于質(zhì)粒的轉化擴增，冰浴靜置約10分鐘，后續可以直接涂板并培養過(guò)夜；如果用于連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物的轉化，建議冰浴靜置30分鐘并嚴格執行后續的熱激處理和復蘇培養等步驟，以提高轉化效率。

3.熱激處理。將冰浴放置的離心管快速置于42℃水浴中，靜置熱激45秒。隨后立即轉移至冰水浴中靜置2分鐘以快速冷卻至接近零度。熱激及轉移至冰浴過(guò)程中切勿晃動(dòng)離心管。

4.復蘇培養。加入900μl不含抗生素的LB培養基，顛倒數次混勻，37℃搖床約150rpm復蘇培養1小時(shí)。如果用于質(zhì)粒的轉化擴增，復蘇培養10-20分鐘也wan全足夠了；如果用于連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物的轉化，建議嚴格進(jìn)行復蘇培養操作。

5.收菌涂板。約5000×g室溫離心1分鐘，沉淀細菌，吸除約900-950μl上清，余下約50-100μl上清。用移液器輕輕吹打并重懸菌體，隨后涂布到含相應抗生素的LB平板上。

注：如果用于質(zhì)粒的轉化擴增，可以?xún)H取少量進(jìn)行涂板；如果用于連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物的轉化，建議取所有重懸的菌液涂板。

6.將平板倒置放于37℃培養箱培養過(guò)夜。

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