Western blot的內參該如何選擇

　　內參即是內部參照（Internal Control），對于哺乳動(dòng)物細胞來(lái)說(shuō)一般是指由管家基因編碼表達的蛋白（Housekeeping Proteins），它們在各組織和細胞中的表達相對恒定，在檢測蛋白的表達水平變化時(shí)常用它來(lái)做參照物。那么你知道Western blot的內參該如何選擇嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

　　為什么要使用內參

　　Western blot除了能證明某樣品含有某種蛋白之外，其最為重要的作用是比較不同條件下或者不同組織中，目的蛋白表達量的相對多少。即為蛋白表達水平最直接的證據。要衡量蛋白的表達水平，前提條件就是等量的上樣量。然而如果僅將蛋白濃度測定作為規范需相互比較的各種樣品間上樣量等同的唯1方法，顯然是不可取的。

　　在Western Blot中使用內參其實(shí)就是在WB過(guò)程中另外用內參對應的抗體檢測內參，這樣在檢測目的產(chǎn)物的同時(shí)可以檢測內參的表達，由于內參在各組織和細胞中的表達相對恒定，借助檢測每個(gè)樣品內參的量就可以用于校正上樣誤差，這樣半定量的結果才更為可信。此外使用內參可以作為空白對照，檢測蛋白轉膜情況是否完q、整個(gè)Western Blot顯色或者發(fā)光體系是否正常。

　　如何選擇內參

　　一般來(lái)說(shuō)，我們再選擇內參時(shí)需要考慮以下幾個(gè)因素：

　　1、蛋白表達豐度：內參應該在樣本中穩定表達，且表達量相對較高，這樣才能有效地檢測到內參信號。

　　2、分子量：內參的分子量應該與目標蛋白的分子量有明顯差異，以便在電泳分離時(shí)能夠分開(kāi)。

　　3、細胞類(lèi)型和組織特異性：根據你的實(shí)驗樣本類(lèi)型，選擇適合的內參。例如，β-actin常用于哺乳動(dòng)物細胞，而Tubulin則更適合檢測細胞骨架蛋白。

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