原代細胞分離培養是一項實(shí)驗技術(shù)，它涉及從生物體中提取組織或細胞，并將它們轉移到體外環(huán)境中進(jìn)行培養。這些來(lái)源包括各種組織器官、外周血和胚胎等。在培養過(guò)程中，原代細胞的生長(cháng)速度相對較慢，通常在培養的10代內停止生長(cháng)。因此，通常將培養的細胞歸類(lèi)為原代細胞培養，這些細胞包括第1到第10代的細胞。下面讓我們一起來(lái)看看原代細胞分離的原理吧！
實(shí)驗原理：
原代細胞保持了體內原始細胞的生物學(xué)特性，接近于體內的生長(cháng)特性。因此，它們?yōu)檠芯可矬w細胞的生長(cháng)、代謝和繁殖提供了有力的工具。此外，原代細胞培養還為精準醫療的腫瘤診治模式和個(gè)體化精準用藥提供了支持。
常見(jiàn)的原代細胞類(lèi)型包括上皮細胞、內皮細胞、成纖維細胞、角質(zhì)形成細胞、黑色素細胞、神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞、肝細胞、骨骼肌細胞、平滑肌細胞、成骨細胞、肌細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、滑膜細胞、毛細胞、血細胞和干細胞。
在原代細胞分離培養中，首先從動(dòng)物體內取出各種組織，然后采用不同的方法，如酶消化（通常使用胰蛋白酶/膠原酶）、螯合劑（通常是EDTA）或機械分散，將組織分散成單個(gè)細胞。這些單細胞被放置在適當的培養基中進(jìn)行培養，以在離體環(huán)境中存活、生長(cháng)和繁殖。這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為原代培養，主要包括取材、分離和培養三個(gè)步驟。
以小鼠結腸細胞為例，為了提高目標細胞的純度，原代提取的細胞通常與其他細胞混合。通過(guò)采用生物酶梯度消化和差速貼壁等方法，可以獲得纖維組織和上皮組織的高純度目標細胞。具體地，使用膠原酶I和分散酶II消化結腸組織可分散細胞間質(zhì)，而差異消化和差速貼壁方法則能有效去除成纖維細胞，最終獲得高度純凈的結腸上皮細胞。
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