什么是熒光原位雜交技術(shù)
你知道什么是熒光原位雜交嗎?讓我們一起來看看吧!
一、FISH的定義
熒光原位雜交技術(shù)(FISH)是一種利用熒光信號檢測探針的原位雜交技術(shù)。它將熒光信號的高靈敏度、安全性及直觀性和原位雜交的高特異性結(jié)合起來,通過熒光標(biāo)記的核酸探針與待測樣本核酸進行原位雜交。在熒光顯微鏡下對熒光信號進行辨別和計數(shù),從而對染色體或基因異常的細(xì)胞和組織樣本進行檢測和診斷,為各種基因相關(guān)疾病的分型、預(yù)前和預(yù)后提供準(zhǔn)確的依據(jù)。
二、FISH的原理
FISH分為直接法和間接法。
直接法是在已知堿基序列的核酸探針上標(biāo)記熒光素,在組織切片、間期細(xì)胞及染色體標(biāo)本上與靶核酸進行原位雜交。因所形成的雜交體帶有熒光素。故可在熒光顯微鏡下直接觀察。
間接法使用非熒光物質(zhì)標(biāo)記的核酸探針。如生物素或地高x等標(biāo)記探針,再通過親和連接或免疫反應(yīng)帶入熒光物質(zhì)來檢測雜交體的存在。
廣義上講,F(xiàn)ISH靶序列可以是DNA或RNA,既可以用來進行基因組層面的研究,也可以進行表達(dá)層面的研究。
目前常用的熒光素有異硫氰酸熒光素、得克薩斯紅、羅丹明及其衍生物四甲基異硫氰酸羅丹明等。
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