神經(jīng)母細胞瘤條件重編程培養基

產(chǎn)品名稱(chēng)：原代神經(jīng)母細胞瘤條件重編程培養基(Human Neuroblastoma Conditional Reprogramming Medium)
產(chǎn)品說(shuō)明：原代神經(jīng)母細胞瘤條件重編程培養基（Human Neuroblastoma Conditional Reprogramming Medium）是一種為促進(jìn)人源神經(jīng)母細胞瘤原代細胞體外生長(cháng)而開(kāi)發(fā)的培養基。它是一種無(wú)菌的液體混合系統，含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機和無(wú)機化合物、激素、生長(cháng)因子、微量礦物質(zhì)等。該培養基產(chǎn)品基于碳酸氫鹽的緩沖體系，在5%CO2、37℃培養箱中平衡時(shí)，pH值為7.4。該培養基的配方可以提供一個(gè)理想人源神經(jīng)母細胞瘤原代細胞體外培養環(huán)境，選擇性地促進(jìn)體外人源神經(jīng)母細胞瘤原代細胞的生長(cháng)。實(shí)現了體外培養周期短、成本可控、操作便捷的目的，提高了腫瘤組織原代細胞培養成功率。

產(chǎn)品優(yōu)勢：
(1) 培養成功率高

(2) 體外持續擴增

(3) 保持腫瘤原始病理特征

(4) 藥敏結果宇臨床數據接近

使用說(shuō)明
?使用前準備
(1) y射線(xiàn)照射過(guò)的NIH-3T3細胞（40Gy輻照）。
(2)15mL無(wú)菌離心管、移液器、移液管、無(wú)菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺中紫外照射30min。提前30min從4℃冰箱取出原代細胞培養基平衡至室溫。
?神經(jīng)母細胞瘤原代細胞培養
（1）獲取的人源神經(jīng)母細胞瘤原代細胞，按照表1中細胞數接種在合適的培養器皿中，加入y射線(xiàn)輻照后的NIH-3T3細胞（添加滋養細胞數量如表1和表2所示）。
（2）原代細胞初次接種后2~3天勿動(dòng)（利于細胞貼壁），培養過(guò)程中若培養基顏色變黃但細胞未長(cháng)滿(mǎn)時(shí)可進(jìn)行半換液。
（3）鏡下觀(guān)察細胞未長(cháng)滿(mǎn)但3T3細胞已不足時(shí)，適量補充γ 射線(xiàn)輻照后的3T3細胞（一般補加初始數目的一半）。

注∶針對實(shí)體瘤樣本，細胞粒徑大于12微米進(jìn)行計數;倍增時(shí)間>48小時(shí)則定義為增殖較慢的細胞;對于增殖較快細胞，可以綜合倍增時(shí)間、接種器皿的規格以及培養周期來(lái)估算接種的細胞數量;表格供參考，具體實(shí)驗具體對待。
?神經(jīng)母細胞瘤原代細胞傳代
（1）鏡下觀(guān)察細胞形成克隆及神經(jīng)元樣細胞增殖，且匯合度85~95%時(shí)即可傳代。
（2）培養箱中取出細胞，棄舊培養液，0.05%胰酶洗滌5秒后吸盡，再加入適量0.05%胰酶，37℃孵育，2~5 min后拿出輕拍培養瓶/板側面，顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況。
（3）細胞消化至細胞變圓并開(kāi)始脫落時(shí)用原代細胞終止培養基終止消化，并將細胞轉移至離心管中，1500 rpm,3 min。
（4）棄上清，以1~5mL條件培養基重懸細胞，活細胞計數，將細胞懸液按適合的細胞密度接種于培養瓶/板，加入y射線(xiàn)輻照后的NIH-3T3細胞（不同規格培養瓶/板底面積、接種原代細胞數量、添加滋養細胞數量如表1、表2 所示），補加條件培養基至所需體積，十字交叉混勻，培養容器75%表面消毒后置37℃、5%CO2培養箱培養。其他步驟同上。
注意事項：
1.本產(chǎn)品在使用前需平衡至室溫。
2.本產(chǎn)品中含有胎牛血清和原代細胞專(zhuān)用抗生素，如無(wú)特別需要不用額外再添加血清和雙抗，可直接使用。
3.樣本需為腫瘤組織，且腫瘤細胞比例越高（>50%），培養成功率越高。
4.為保持本產(chǎn)品的理想使用效果，不宜將其過(guò)夜放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。
5.請于保質(zhì)期內使用本產(chǎn)品，超出保質(zhì)期，必須放棄使用。
6.原代細胞初次接種時(shí)會(huì )貼壁較慢和貼壁不牢，若無(wú)必要，盡量減少取出觀(guān)察的次數，建議2~3天一次。
7.傳代消化時(shí)切記不要消化過(guò)度，不宜超過(guò)5min，對細胞造成損傷，影響細胞狀態(tài)。
8.接種細胞時(shí)注意細胞密度，不可過(guò)稀或過(guò)密。
9.使用產(chǎn)品時(shí)應注意無(wú)菌操作，避免污染。
10.本產(chǎn)品僅用于科研用途，不能用于體外診斷。