原代乳腺上皮細胞*培養基

產(chǎn)品名稱(chēng)：原代乳腺上皮細胞*培養基（Human Mammary Epithelial Cell Medium）
產(chǎn)品說(shuō)明：原代乳腺上皮細胞*培養基（Human Mammary Epithelial Cell Medium）是一種促進(jìn)人乳腺原代上皮細胞體外生長(cháng)的培養基。該產(chǎn)品是一種無(wú)菌的液體混合系統，含有維持目的細胞生長(cháng)所必需的氨基酸、維生素、有機和無(wú)機化合物以及生長(cháng)因子等。培養基基于碳酸氫鹽的緩沖體系，在5%CO2/95%空氣的培養箱中平衡時(shí)，pH值為7.4。該培養基的配方可以提供一個(gè)合適的營(yíng)養環(huán)境，選擇性地促進(jìn)體外人乳腺原代上皮細胞的生長(cháng)和擴增。


產(chǎn)品優(yōu)勢：
(1) 培養成功率高

(2) 體外持續擴增

(3) 保持腫瘤原始病理特征

(4) 藥敏結果與臨床數據接近

使用說(shuō)明：
?使用前準備
（1）15mL無(wú)菌離心管、移液器、移液管、無(wú)菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺中紫外照射30min。
（2）提前30min從4℃冰箱取出*培養基平衡至室溫，提前從-20℃冰箱取出所需體積的細胞外基質(zhì)膠冰上融化。
?乳腺原代細胞培養
（1）采用預冷的DMEM/F12培養基將細胞外基質(zhì)膠（Corning#356231）按1∶ 50比例稀釋?zhuān)辽偬崆?0min 將稀釋后的基質(zhì)膠預鋪在培養瓶/板底部表面，并使其*覆蓋底部表面，30~60 min后吸干備用。
（2）將分離并計數后的細胞懸液參考表1中細胞數量接種于培養瓶/板，補加*培養基至所需體積，輕輕搖晃混勻，表面消毒后放置于培養箱，37℃、5%CO2條件下進(jìn)行培養。
（3）原代細胞初次接種后2-3天內勿動(dòng)（利于細胞貼壁）。

?原代乳腺上皮細胞傳代
（1）鏡下觀(guān)察細胞形成克隆，且匯合度達80~90%時(shí)即可傳代。
（2）培養箱中取出細胞，棄去舊培養液，加入適量TrypLE*Express酶（Gibco#12605010）37℃孵育，10~20min后取出，輕拍培養瓶/板側面，顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況。
（3）細胞消化至細胞變圓并開(kāi)始脫落時(shí)用含10%胎牛血清的DMEM培養基終止消化，并將細胞轉移至離心管中，室溫，300g，離心5min。
（4）棄上清，以1-2mL*培養基重懸細胞，活細胞計數，將細胞懸液按適合的細胞密度接種于預鋪有基質(zhì)膠的培養瓶/板底部，預鋪方法同上。
（5） 補加*培養基至所需體積，輕輕搖晃混勻，表面消毒后置于培養箱，37℃、5%CO2條件下繼續培養。
注意事項：