食管癌3D類(lèi)器官培養基

產(chǎn)品名稱(chēng)：食管癌3D類(lèi)器官培養基（ESophaqus Carcinoma Organoid Medium）
產(chǎn)品說(shuō)明：食管癌3D類(lèi)器官培養基（ESophaqus Carcinoma Organoid Medium）是一種為促進(jìn)食管鱗癌類(lèi)器官體外形成和擴增而設計的培養基。它是一種無(wú)菌的液體混合系統，含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機和無(wú)機化合物、激素、生長(cháng)因子、微量礦物質(zhì)等。該培養基的*配方可以提供一個(gè)較適的食管鱗癌類(lèi)器官擴增所需營(yíng)養環(huán)境，選擇性地促進(jìn)體外人食管鱗癌類(lèi)器官的生長(cháng)。

產(chǎn)品優(yōu)勢：
(1) 培養成功率高

(2) 體外持續擴增

(3) 保持腫瘤特征

(4) 藥敏結果與臨床數據接近

使用說(shuō)明：
?實(shí)驗前準備
（1）消化好的食管癌原代細胞懸液。
（2）15mL無(wú)菌離心管、1.5mL離心管、24孔細胞培養板、移液器、移液管、無(wú)菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺中紫外照射30 min。
（3）提前30min從4℃冰箱取出食管癌類(lèi)器官培養基平衡至室溫，提前從-20℃冰箱取出所需體積的基質(zhì)膠冰上融化。
?食管癌類(lèi)器官培養
（1）將消化好的食管癌細胞懸液計數，按照1-2萬(wàn)細胞每孔計算所需的細胞數，根據計算好的體積吸取細胞懸液加入預冷的1.5mL離心管中，補齊預冷的DMEM/F12至所需體積。
（2）將預冷后的細胞懸液加入等體積的基質(zhì)膠中輕輕混勻（全程冰上操作），然后將細胞與基質(zhì)膠的混合液按照40μL/孔接種于24孔板。
（3）將接種好的培養板放入培養箱至少30min，待基質(zhì)膠*凝固，然后沿24孔壁每孔緩慢加入500μL預先恢復至室溫的類(lèi)器官培養基，3天后鏡下觀(guān)察類(lèi)器官形成情況，粒徑大于50μm即認為類(lèi)器官已經(jīng)形成。
（4）每5天更換一次培養基進(jìn)行培養，持續觀(guān)察類(lèi)器官大小，鏡下觀(guān)察大部分類(lèi)器官大小均大于50μm且大小不再增大即可收集類(lèi)器官進(jìn)行后續實(shí)驗。
?食管癌類(lèi)器官收集
（1）吸去培養基，每孔加入200μL基質(zhì)膠解離試劑，輕輕吹打混勻，收集至15mL離心管中。
（2）37℃解離30min（具體解離時(shí)間根據實(shí)際情況決定，以無(wú)明顯大塊膠狀物為準），解離之后1500rpm離心3min，輕輕吸去上清，待用。
?食管癌類(lèi)器官傳代
（1）解離之后的細胞加入適量的消化酶，37℃，200rpm消化（具體時(shí)間根據類(lèi)器官大小和數量決定，以無(wú)肉眼可見(jiàn)顆粒為準）。
（2）消化*后1500rpm離心3min，輕輕吸去上清，使用終止培養基重懸后1500rpm離心3min，加入預冷的DMEM/F12培養基進(jìn)行重懸，計數，按照培養步驟操作繼續培養。
注意事項：
1.本產(chǎn)品在使用前需平衡至室溫。
2.使用產(chǎn)品時(shí)應注意無(wú)菌操作，避免污染。
3.為保持本產(chǎn)品的理想使用效果，不宜將其過(guò)夜放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。4.請于保質(zhì)期內使用本產(chǎn)品，超出保質(zhì)期，必須放棄使用。
5.樣本需為食管鱗癌術(shù)中樣本，且腫瘤細胞比例越高（至少>50%），培養成功率越高，不推薦用于少量樣本（如內鏡或者循環(huán)腫瘤細胞）的培養。
6.本產(chǎn)品僅用于科研用途，不能用于體外診斷。