親和層析介質(zhì)純干貨分享

  親和層析（Affinity chromatography）是一種根據生物分子與其他配基分子之間特異性結合的原理來(lái)分離物質(zhì)的層析方法。通過(guò)配基與目標分子之間的可逆結合來(lái)實(shí)現純化目標分子的目的。親和層析具有高選擇性，而且能有效地保持生物大分子高級結構的穩定性，同時(shí)還具有對活性樣品高回收率的特點(diǎn)，是當前最為理想的分離純化蛋白的方法。

親和層析原理

常用的生物親和關(guān)系有：

親和層析介質(zhì)是在交聯(lián)瓊脂糖上連接不同親和配基構成的介質(zhì)，由基質(zhì)、配基和間隔臂三個(gè)部分組成。親和層析介質(zhì)按配基不同又可分為多種類(lèi)型，比如Protein A和Protein G親和層析介質(zhì)，GST親和層析介質(zhì)，IMAC（金屬螯合介質(zhì)）親和層析，Heparin（肝素）親和層析介質(zhì)等。

親和層析介質(zhì)結構

對于IgG的純化，大部分情況下會(huì )選擇使用Protein A或Protein G進(jìn)行親和層析。因為它們對于IgG的Fc段具有特異性的親和作用。

其中Protein A是從金黃色葡萄球菌細胞壁分離的蛋白質(zhì)，可特異性與人或哺乳動(dòng)物抗體（主要是IgG）的Fc區域結合，主要結合亞類(lèi)為IgG1、IgG2和IgG4。分為天然Protein A和重組Protein A。重組Protein A更耐堿性，且耐受蛋白酶。

Protein G是從G類(lèi)鏈球菌中分離出來(lái)的胞壁蛋白。相對于Protein A，Protein G對于大多數哺乳動(dòng)物的IgG有著(zhù)更高的親和力，尤其是對于IgG的亞基，如人IgG3，小鼠IgG1和IgG2a。因此，Protein G可用于純化不能與Protein A很好結合的哺乳動(dòng)物單抗和多抗IgG。

   GST親和層析介質(zhì)是一種用于快速純化谷胱甘肽s -轉移酶(GST)標記蛋白、其他谷胱甘肽轉移酶以及與谷胱甘肽有親和作用的蛋白質(zhì)的分離介質(zhì)，可以快速純化細菌、酵母、昆蟲(chóng)和哺乳動(dòng)物細胞培養物中表達的GST標記蛋白。

IMAC親和層析介質(zhì)是基于某些過(guò)渡金屬離子（主要是Ni²⁺、Zn²⁺和Co²⁺）與含有組氨酸（或半胱氨酸和色氨酸）的暴露氨基酸表面鏈之間的特定相互作用。IMAC用于純化在細菌、酵母和哺乳動(dòng)物細胞中表達的帶組氨酸標簽的重組蛋白，還可用于純化某些天然的非標記蛋白質(zhì)，例如干擾素、凝集素、抗體、血清和血漿蛋白、肽和肽激素。

Heparin親和層析介質(zhì)用于純化對肝素有親和力的生物分子，如抗凝血酶III、凝血因子和其他血漿蛋白、DNA 結合蛋白、脂蛋白、蛋白質(zhì)合成因子、作用于核酸的酶和類(lèi)固醇受體等。

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