Lipo3000細胞轉染的實(shí)驗步驟及注意事項

細胞轉染常用的轉染試劑很多，其中，Lipo3000深受廣大科研工作者的喜愛(ài)，那我們來(lái)看看Lipo3000細胞轉染的實(shí)驗步驟及注意事項吧！

一、實(shí)驗前準備

Lipofectamine™ 3000 轉染試劑（Thermo Fisher）、Opti-MEM（可以用無(wú)血清的培養基代替）

二、實(shí)驗步驟

1.接種細胞，使其在轉染時(shí)達到70–90% 匯合度。

注：對于HEK293，6孔板一般鋪50萬(wàn)個(gè)細胞左右。對于PC9, 24孔板一般鋪5-10萬(wàn)個(gè)細胞。由于不同細胞，生長(cháng)狀況不太一樣，需要根據情況調整。

2. 使用Opti-MEM™培養基稀釋Lipofectamine™ 3000 試 劑，充分混勻。

3.使用Opti-MEM™培養基稀釋DNA，制備 DNA 預混液，然后添加P3000™ 試劑，充分混勻。

4.將上面兩步溶液合在一起，混勻并孵育10-15mins。

5.將混勻后的溶液加入到細胞培養基中，并輕輕搖晃培養基，使其均勻。

6.37°C 孵育細胞 2–4 天，然后分析轉染細胞。

轉染量：

三、注意事項

1.Opti-MEM需要37℃水浴鍋預熱。

2.轉染 siRNA 至細胞時(shí)，在稀釋 siRNA 時(shí)不要加入 P3000™ 試劑。

3.關(guān)于Lipo3000的用量，比如6孔板推薦用量有兩個(gè)3.75ul和7.5ul，最di看轉染xiao率，最高看細胞耐受。

4. Opti-MEM與Lipo3000預混及Opti-MEM、質(zhì)粒及P3000預混，都不需要各自孵育，而且兩者混合后孵育時(shí)間最多不要超過(guò)15mins。

5.轉染中和轉染后的細胞培養基中最好不要含有雙抗。

對于比較好轉染的細胞，如HEK293，而且需要大量轉染的時(shí)候，可以使用PEI進(jìn)行轉染，畢竟Lipo3000比較貴。例如，在做CO-IP實(shí)驗時(shí)，需要10cm皿轉染好幾種質(zhì)粒，就可以用PEI進(jìn)行細胞轉染。CO-IP步驟見(jiàn)免疫共沉淀Co-IP實(shí)驗步驟。

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