流式細胞術(shù)(FCM)是一種對處在快速流動(dòng)中的細胞或其它生物微粒逐個(gè)進(jìn)行多參數的快速定量分析和分選的技術(shù)。它集計算機技術(shù)、激光技術(shù)、流體力學(xué)、熒光標記技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)、細胞免疫學(xué)于一體,按照細胞或生物顆粒的物理或化學(xué)性質(zhì),同時(shí)具有分析和分選細胞或生物顆粒的功能。那么你知道流式細胞術(shù)的應用有什么嗎?讓我們一起來(lái)看看吧!
一、流式細胞術(shù)科研應用
1.細胞凋亡檢測
在正常細胞中,細胞膜上的磷脂酰絲氨酸(PS)位于胞漿側。細胞凋亡中期,PS 外翻。Annexin V 是一種 Ca2+ 依賴(lài)的對 PS 具有高度親和力的磷脂結合蛋白,因此可以用熒光標記的 Annexin V 檢測 PS 的外翻。凋亡末期,細胞膜結構受損,原本不透膜的核酸染料(如 PI、7-AAD 等)也能進(jìn)入細胞,從而產(chǎn)生信號。分別檢測 Annexin V 和不透膜核酸染料的信號,可對凋亡中期和末期細胞的比例進(jìn)行定量。
2.細胞周期檢測
細胞核 DNA 含量隨著(zhù)細胞增殖周期時(shí)相的不同而發(fā)生變化,用 DNA 染料進(jìn)行染色,DNA 含量多,熒光信號強,DNA 含量少,熒光強度低。通過(guò)對細胞瞬間的快速測定,判斷細胞所處的細胞周期時(shí)相,并分析群體細胞中處于不同周期時(shí)相的細胞比例,以研究細胞的周期,DNA 復制和染色體倍性等。在腫瘤學(xué)研究中尤其常用,可以此來(lái)判斷藥物對腫瘤細胞影響、腫瘤的生長(cháng)速度與患者預后等。
3.Th/Treg檢測
通過(guò)刺激阻斷劑對 T 細胞進(jìn)行處理,通過(guò)檢測表面或胞內標志物進(jìn)行分型檢測。
4.免疫分型檢測
利用細胞表面或細胞內特異性抗體分子,分別選用不同標記的流式抗體對細胞進(jìn)行分型和分析。
利用抗原/抗體反應原理,采用不同的流式抗體對樣本進(jìn)行檢測可達到對不同細胞進(jìn)行分型檢測的目的。
5.細胞因子檢測
采用 CBA 或液相芯片的方法將捕獲抗體和微球/液相芯片結合,檢測抗體和 SA-PE 結合通過(guò)抗原抗體特異性反應達到多種細胞因子檢測的目的。
二、流式細胞術(shù)生物產(chǎn)業(yè)應用
流式細胞術(shù)生物產(chǎn)業(yè)應用主要為生物醫藥和醫療器械公司醫藥和醫療器械研發(fā)使用。
流式細胞檢測離不開(kāi)流式細胞儀、流式抗體和檢測樣本 3 部分,而其中流式細胞儀則是最重要的,它是一種集激光技術(shù)、電子物理技術(shù)、光電測量技術(shù)、計算機技術(shù)以及細胞熒光化學(xué)技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)為一體的高科技儀器。主要由液流系統、光學(xué)系統、電子系統、數據分析系統等組成。
自 1973 年第yi臺商用流式細胞儀問(wèn)世以來(lái),經(jīng)過(guò)近 50 年的發(fā)展流式細胞儀在結構上發(fā)生了一系列的演變:由簡(jiǎn)單到復雜、由單激光到多激光、由單色到多色、由分析到分選、從傳統流式到質(zhì)譜流式和光譜流式等。
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