如何提高DNA純度測定的準確性？

分子生物學(xué)實(shí)驗中經(jīng)常需要對樣本進(jìn)行濃度和純度的測定，它相當于一種質(zhì)控，以此來(lái)確保下游實(shí)驗的結果可靠。那么該如何提高DNA純度測定的準確性呢？讓我們一起來(lái)看看吧！

常用的DNA濃度/純度測定設備是紫外分光光度計，它的原理是利用物質(zhì)分子對紫外可見(jiàn)光譜區的輻射吸收來(lái)進(jìn)行分析物質(zhì)成分。假設現在有一樣物質(zhì)A，它溶解在溶液內，當光照射溶液時(shí)，溶液內的A會(huì )吸收一部分的光。不同顏色的光有不同的波長(cháng)，A對不同顏色的光（不同波長(cháng)）的吸收程度是不一樣的。

雙鏈的DNA，它能對波長(cháng)為260nm的光進(jìn)行強烈的吸收，吸收的程度可以用一個(gè)叫吸光度的數值來(lái)測量，濃度越高的DNA，理論上吸光度也越高。

最后，通過(guò)與標準品的吸光度數值對比后，就可以知道未知濃度的DNA有多少量了。

DNA濃度測定通常會(huì )使用紫外分光光度計，常見(jiàn)的有NanoDrop這類(lèi)設備。除了DNA，它還能測定RNA和蛋白的吸光度。

要提高濃度測定的準確性，需要注意以下幾點(diǎn)：

1. 檢測之前，務(wù)必充分混勻DNA溶液，因為這類(lèi)機器的上樣檢測體積只需要1-2uL，如果樣品沒(méi)有混勻，那么每次檢測樣品濃度也會(huì )不一樣。

2. 因為上樣體積很小，所以樣品很容易揮發(fā)，如果把樣品加在檢測基座后不馬上檢測的話(huà)，會(huì )導致測出來(lái)的樣品濃度偏高。

3. 實(shí)驗環(huán)境和耗材的穩定性要高。檢測設備應該在放置在溫度可控、通風(fēng)的環(huán)境下；裝樣品的管子如果不是要進(jìn)行吸取樣品操作的話(huà)，需要時(shí)刻緊閉。

4. 每次檢測完畢，都需要對檢測基座或者比色皿進(jìn)行清洗和擦拭，確保不會(huì )有樣品殘留后，再進(jìn)行下一次上樣檢測。

5. 空白調零，應該使用溶解待檢測樣品的溶液來(lái)調零。例如如果用水溶解DNA，那就用水調零，用其他緩沖液溶解，則用對應的緩沖液調零。

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