如何確認RNA的質(zhì)量？

樣本種類(lèi)繁多且復雜，有些樣本，要想提取到質(zhì)量良好的RNA是非常困難的，那么該如何確認RNA的質(zhì)量呢？讓我們一起來(lái)看看吧！

確認RNA的質(zhì)量有以下兩種常見(jiàn)方法

1）檢測RNA溶液的吸光度

280、320、230、260nm下的吸光度分別代表了核酸、背景（溶液渾濁度）、鹽濃度和蛋白等有機物的值。一般的，我們只看OD260/OD280（Ratio，R）。

1.82.0時(shí)，我們認為RNA中蛋白或者時(shí)其他有機物的污染是可以容忍的，不過(guò)要注意，當你用Tris作為緩沖液檢測吸光度時(shí)，R值可能會(huì )大于2（一般應該是<2.2的）。當R<1.8時(shí)，溶液中蛋白或者時(shí)其他有機物的污染比較明顯，你可以根據自己的需要決定這份RNA的命運。當R>2.2時(shí)，說(shuō)明RNA已經(jīng)水解成單核酸了。

2）RNA的電泳圖譜

一般來(lái)說(shuō)，RNA的電泳都是用變性膠進(jìn)行的，但是根據經(jīng)驗，如果你僅僅是為了檢測RNA的質(zhì)量是沒(méi)有必要進(jìn)行如此麻煩的實(shí)驗的，用普通的瓊脂糖膠就可以了。

電泳的目的是在于檢測28S和18S條帶的完整性和他們的比值，或者是mRNA smear的完整性。一般來(lái)說(shuō)，如果28S和18S條帶明亮、清晰、條帶銳利（指條帶的邊緣清晰），并且28S的亮度在18S條帶的兩倍以上，我們認為RNA的質(zhì)量是好的。

以上是我們常用的兩種方法，但是這兩種方法都無(wú)法明確的告訴我們RNA溶液中有沒(méi)有殘留的RNA酶。如果溶液中有非常微量的RNA酶，用以上方法我們很難察覺(jué)，但是大部分后續的酶學(xué)反應都是在37度以上并且是長(cháng)時(shí)間進(jìn)行的。這樣，如果RNA溶液中有非常微量的RNA酶，那么在后續的實(shí)驗中就會(huì )受到殘留的RNA酶的干擾，從而導致實(shí)驗失敗

下面，我們介紹一個(gè)可以確認RNA溶液中有沒(méi)有殘留的RNA酶的方法。

3）保溫試驗

按照樣品濃度，從RNA溶液中吸取兩份1000 ng的RNA加入至0.5 ml的離心管中,并且用pH7.0的Tris緩沖液補充到10 ul的總體積，然后密閉管蓋。把其中一份放入70℃的恒溫水浴中,保溫1 h。另一份放置在-20℃冰箱中保存1 h。

1h后取出兩份樣本進(jìn)行電泳。電泳完成后，比較兩者的電泳條帶。如果兩者的條帶一致或者無(wú)明顯差別（當然，它們的條帶也要符合方法2中的條件），則說(shuō)明RNA溶液中沒(méi)有殘留的RNA酶污染，RNA的質(zhì)量很好。相反，如果70℃保溫的樣本有明顯的降解，則說(shuō)明RNA溶液中有RNA酶污染。

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