ELISA的常見(jiàn)問(wèn)題有哪些？解決方法是什么？

酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay，簡(jiǎn)寫(xiě)ELISA或ELASA）指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結合進(jìn)行免疫反應的定性和定量檢測方法。那么你知道ELISA的常見(jiàn)問(wèn)題有哪些？解決方法是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、高背景或陰性對照只偏高

原因：

1. 陰性對照孔被陽(yáng)性對照貨樣品污染

2. 抗體非特異性結合

3. 酶結合物過(guò)濃

4. 孵育溫度過(guò)高

解決方法：

1. 洗滌是，勿將洗液溢出孔外

2. 封閉液不合適，更換封閉液

3. 請檢查酶結合物是否按說(shuō)明書(shū)規定稀釋

4. 檢查孵育箱的溫度是否正確、穩定

二、標準曲標準曲線(xiàn)良好，但樣本無(wú)檢測信號

原因：

1. 樣本中無(wú)檢測物或檢測無(wú)含量極低

2. 樣本中其它物質(zhì)影響/掩蓋檢測

3. 樣本中檢測物濃度過(guò)高，HOOK效應導致假低值

解決方法：

1. 設置內參，重新實(shí)驗

2. 作適當稀釋?zhuān)档推渌镔|(zhì)的干擾，或作系列稀釋?zhuān)瑱z測回收率

3. 適當倍數稀釋樣本，檢測物濃度盡量在試劑盒檢測范圍內

三、重復性較差

原因：

1. 微孔中有氣泡

2. 試劑未混勻

3. 樣本中有雜質(zhì)或沉淀物

4. 微孔包被面被吸頭劃破

解決方法：

1. 用針尖挑破氣泡

2. 確保充分混勻試劑

3. 使用前；離心

4. 加液是小心操作

四、假陽(yáng)性反應

原因：

1. 洗滌不充分

2. 洗板機管道堵塞

3. 加結合物是，灑在微孔邊緣

解決方法：

1. 使用前需檢查洗板機是否正常工作

2. 需經(jīng)常維護洗板機

3. 小心向微孔加入結合物，加入微孔底部中央，避免與孔壁和邊緣接觸

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