細胞表面染色實(shí)驗操作流程是什么？

你知道細胞表面染色實(shí)驗操作流程是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、細胞計數

將培養好的細胞收集于15mL離心管并計數；500g離心4min，去上清。

二、制備單細胞懸液

將收集的細胞用1mL 0.5%BSA/PBS溶液重懸，400g離心3min，去上清，重復2次；用0.5%BSA/PBS溶液重懸細胞至濃度1x106個(gè)細胞/mL，分配到96孔板中，每孔100μl細胞懸液。

三、阻斷Fc受體

室溫孵育10-20min。

四、一抗孵育

每孔加入稀釋后的一抗溶液100μl，2-8℃反應30min。

五、洗滌

400g離心5min，去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸，離心去上清，重復兩遍。

六、二抗孵育

對于非熒光染料直標抗體，加入100μl熒光二抗重懸，避光2-8℃反應30min。對于直標抗體直接跳到步驟八。

七、洗滌

400g離心5min，去上清后加入200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸，離心去上清，重復兩遍。

八、重懸細胞

用200μl 0.5%BSA/PBS溶液重懸細胞，4℃保存，上機分析。

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