Elabscience一步法TUNEL原位細胞凋亡檢測試劑盒的常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法有什么

Elabscience® One-step TUNEL In Situ Apoptosis Kit 是一款靈敏度高且能快速簡(jiǎn)便的檢測細胞凋亡的產(chǎn)品。本試劑盒適用于組織樣本(石蠟切片、冰凍切片)和細胞樣本(細胞涂片、細胞爬片)的原位凋亡檢測，檢測結果可通過(guò)熒光顯微鏡直接觀(guān)察。那么你知道Elabscience一步法TUNEL原位細胞凋亡檢測試劑盒的常見(jiàn)問(wèn)題有什么嗎？該如何解決呢？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、非特異性染色

原因：

1. TdT酶的濃度過(guò)高。

2. TdT酶反應時(shí)間過(guò)長(cháng)或TdT酶反應過(guò)程中反應液滲漏，細胞或組織表面不能保持濕潤。

3. 光照紫外線(xiàn)導致包埋試劑的聚合（如：甲基丙烯酸會(huì )導致樣本DNA的斷裂）。

4. 在固定組織時(shí)樣本 DNA 已斷裂（內源核酸酶的作用）。

5. 使用了不適當的固定液，例如一些酸性固定液。

6. 固定后某些核酸酶活性依然較高導致 DNA 斷裂。

解決方法：

1. 用TdT Equilibration Buffer以1:2~1:10稀釋。

2. 注意控制反應時(shí)間，并 確保TdT酶反應液能很好地覆蓋樣品。

3. 嘗試改用其它包埋材料或其它聚合試劑。

4. 確保樣品取樣后立即固定或通過(guò)肝靜脈灌注固定。

5. 采用推薦的固定液。

6. 用含有dUTP和dAPT的溶液封閉。

二、標記率低

原因：

1. 如果以乙醇或甲醇固定的樣本則標記效率較低（因為在固定時(shí)染色質(zhì)未能與蛋白質(zhì)交聯(lián)，而在操作中丟失）。

2. 固定時(shí)間過(guò)長(cháng)，導致交聯(lián)程度過(guò)高。

3. 石蠟切片脫蠟不充分。

4. 熒光淬滅。

5. 通透條件不佳，以致于試劑不能到達靶分子或濃度過(guò)低。

解決方法：

1. 用溶于 PBS pH7.4中的4%多聚甲醛固定或福爾馬林或戊二醛固定。

2. 減少固定時(shí)間，或用溶于PBS pH7.4的2%多聚甲醛固定。

3. 延長(cháng)脫蠟時(shí)間；更換新的脫蠟液。

4. 注意避光操作。

5. 增加通透時(shí)間；優(yōu)化蛋白酶K的作用濃度和作用時(shí)間。

三、組織樣本脫落

原因：

組織樣本被酶從載玻片上消化下來(lái)。

解決方法：

降低蛋白酶K的處理時(shí)間。

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