簡(jiǎn)要描述:BrainBits星形膠質(zhì)細(xì)胞全腦培養(yǎng)試劑盒代理——北京百奧創(chuàng)新科技有限公司,現(xiàn)貨供應(yīng)BrainBits試劑盒,更多BrainBits品牌產(chǎn)品介紹,歡迎咨詢!
一、BrainBits星形膠質(zhì)細(xì)胞全腦培養(yǎng)試劑盒內(nèi)容
該試劑盒內(nèi)含:1 E18小鼠全腦、12mL NbAstro、6.2mg木瓜蛋白酶、5mL HE-Ca 、1個(gè)帶橡膠球的火拋光移液、1對(duì)PDL涂層蓋板
二、BrainBits星形膠質(zhì)細(xì)胞全腦培養(yǎng)試劑盒產(chǎn)品簡(jiǎn)介
該試劑盒包含從新鮮組織開(kāi)始培養(yǎng)所需的一切。E18組織用2ml含B27的THRYVE胚胎儲(chǔ)存介質(zhì)運(yùn)送。立即使用組織以獲得最高的細(xì)胞產(chǎn)量,但組織可在4-8°C下保存一周。這個(gè)試劑盒是完mei的研究人員剛剛開(kāi)始或?yàn)槟切┱l(shuí)想要的可靠性。非常適合課堂教育,為下一代研究人員提供實(shí)踐方法。
三、產(chǎn)品操作
(1)細(xì)胞分散(無(wú)菌操作箱中的室溫)
A、用 2 毫升移液管小心地將組織轉(zhuǎn)移至木瓜蛋白酶中,盡量減少培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)移。將 THRYVE 胚胎完quan培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至一個(gè)新的無(wú)菌 15 毫升管中,以備第三步使用。
B、將組織和木瓜蛋白酶在30℃下孵育 10 分鐘。每 2 分鐘輕輕攪拌一次,或者使用加熱振蕩板,溫度為30℃,轉(zhuǎn)速為 150 轉(zhuǎn)/分鐘。
C、用 2 毫升移液管從木瓜蛋白酶中取出含有少量培養(yǎng)基的組織,并返回步驟 A中的 THRYVE 胚胎完quan培養(yǎng)基中。
D、使用涂有硅油的巴斯德移液管,研磨組織不超過(guò) 10 次,或分散 90%的組織,避免產(chǎn)生氣泡。
E、讓未分散的顆粒靜置 1 分鐘。可選:向細(xì)胞懸液中加入 400 微升 1 毫克/毫升的 DNase I 溶液,并在室溫下孵育 15 分鐘,每 5 分鐘輕輕攪拌或搖晃試管。
F、將含有分散細(xì)胞的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌的 15 毫升管中。留下約 50 微升含有碎片的 THRYVE 胚胎完quan培養(yǎng)基。可選:通過(guò) 70 微米的細(xì)胞過(guò)濾器過(guò)濾細(xì)胞溶液。
G、以 1100 轉(zhuǎn)/分(200×G)離心 1 分鐘。棄去上清液,留下約 50 微升含有沉淀物的 THRYVE 胚胎完quan培養(yǎng)基。
H、分散細(xì)胞團(tuán)(用手指或試管輕彈管底),然后將細(xì)胞團(tuán)重新懸浮于 1 毫升的星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基(NbAstro™)中。
I、將 20 微升細(xì)胞溶液分裝到含有 80 微升臺(tái)盼藍(lán)(1:5 稀釋)的 0.5 毫升管中。
J、使用血細(xì)胞ji數(shù)器(計(jì)算細(xì)胞/毫升)或采用當(dāng)前的實(shí)驗(yàn)室程序來(lái)計(jì)數(shù)細(xì)胞。 (2)細(xì)胞培養(yǎng)(無(wú)菌室中的室溫)
A、用 0.2 毫升/平方厘米的 NbAstro™ 稀釋細(xì)胞,并以 7500 個(gè)細(xì)胞/平方厘米或期望的濃度進(jìn)行鋪板。注意:以更高的密度鋪板會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞的混合。
B、孵化時(shí)間37 ℃、5%的二氧化碳2、9%的氧氣2、95%的濕度(或環(huán)境濕度O2 ))
C、 每 3 - 4 天用新鮮的、37℃、二氧化碳平衡的 NbAstro 更換一半的培養(yǎng)基。
D、1.5 至 2 周后,星形膠質(zhì)細(xì)胞將有 90%融合,準(zhǔn)備收獲或傳代。
E、若要轉(zhuǎn)移到神經(jīng)元培養(yǎng)物中:提前 24 小時(shí),將一半的培養(yǎng)基更換為 Neurobasal®/B27®/GlutaMAX™(NbActiv1™)。
F、對(duì)于擴(kuò)增:用 0.25%胰蛋bai酶在 THRYVE 胚胎培養(yǎng)基中收獲細(xì)胞,(37 ℃,5 分鐘)。
G、若要抑制胰dan白酶,請(qǐng)使用dan蛋白酶抑制劑或血清。
(3)活力測(cè)定:
A、用 37 ℃平衡yan溶液(0.2 毫升/平方厘米底物)沖洗兩次。
B、從 15mg/ml 熒光素二乙酸酯的丙酮儲(chǔ)備液和 4.6mg/ml 碘化丙啶的水溶液儲(chǔ)備液中制備染色液,將每種溶液稀釋 15 微升至 1.5 毫升的 HBSS 中(1:100 稀釋)。
C、將步驟 B 中的 20 微升染料混合物添加到步驟A中添加的每 0.2 毫升的 HBSS 中(1:10 稀釋)。
D、約 1 分鐘后,使用適合熒光素?zé)晒獾乃{(lán)色激發(fā)來(lái)計(jì)數(shù)活細(xì)胞(綠色細(xì)胞)。使用綠色激發(fā)來(lái)計(jì)數(shù)碘化丙啶熒光(小紅色細(xì)胞核)的死細(xì)胞。
E、活力 =(綠色細(xì)胞/單位面積)/(單位面積上鋪板的總細(xì)胞數(shù)) 或者存活率 = 綠色細(xì)胞/(綠色細(xì)胞 + 紅色細(xì)胞)